植物ELISA檢測試劑盒在樣本處理上有什么要求？

　　植物ELISA檢測試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物可溶性蛋白質（sprotein）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物可溶性蛋白質（sprotein）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

　　樣本處理及要求：
　　1、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
　　2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8°C1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
　　3、細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
　　注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

　　植物ELISA檢測試劑盒的性能：
　　1、檢測范圍：2.5μg/mL–80μg/mL。
　　2、靈敏度：低檢測濃度小于0.1μg/mL。
　　3、特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
　　4、重復性：板內變異系數小于10%，板間變異系數小于15%。

　　操作步驟：
　　1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
　　2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
　　3、樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
　　4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
　　5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
　　7、每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。